‘My Little Pony: La magia de la amistad’ gira en torno a Twilight Sparkle, una unicornio muy estudiosa que se encarga de aprender acerca de la amistad por mandato de la Princesa Celestia, por lo que es enviada al pacífico pueblo de Ponyville. Allí, Twilight se hace amiga de cinco ponis: Applejack, Rainbow Dash, Rarity, Fluttershy y Pinkie Pie. Cada una representa una faceta de la amistad y son la llave esencial de los elementos de la armonía. Todas juntas aprenderán más acerca de la amistad y vivirán maravillosas aventuras en Ponyville.

En cuanto a Twilight Sparke es un pony unicornio dotada de una magia poderosa y que representa el Elemento de la Magia. Fluttershy es un pony pegaso muy tímida pero compasiva y comprensiva con numerosos temores. Pinkie Pie es un pony terrestre muy hiperactiva que le encanta hacer fiestas. Rainbow Dash es un pony pegaso con una personalidad muy competitiva que pretende ser uno de los mejores pegaso en Equestria. Rarity es un pony unicornio que se enorgullece mucho de sí misma y su aspecto, sus modales y sus habilidades para la moda. Applejack es un pony terrestre muy confiable y trabajadora. Y Spike es un bebé dragón y asistente de Twilight y además su mejor amigo